Zenoaq STEMCELLBANKER GMP等级干细胞冻存液

Zenoaq STEM-CELLBANKER GMP Grade

StemCellbanker-GMP-Grade

StemCellbanker-GMP-Grade

特征:

STEM-CELLBANKER® GMP grade 是ZENOAQ公司针对冻存各类贵重的干细胞(胚胎干细胞 、诱导多能干细胞、间充质干细胞等)而特别配制,完全按照Good Manufacture Practice (GMP)规范进行生产和质量管理的细胞・组织冻存液。

  • 有效提高各类干细胞的复苏存活率,而不影响其染色体组形、增殖能力和分化能力。
  • 不会对冻存细胞的DNA或RNA造成损伤,能用来冻存组织。
  • 完全使用日/美/欧药典等最高等级原料,所含成分明确。
  • 不含异源动物成分(Xeno-free)。
  • 完全配方的冻存液,无需调配即可使用。可直接存放于负80度冰箱(不须程序降温),省事省力省时间。
  • 本产品已取得美国FDA和日本PMDA的Drug Master File (DMF)登记号。
规格包装:
20ml, 100ml/瓶
产品应用实例:
1. 使用STEM-CELLBANKER®对人体胚胎干细胞(hESC) 和诱导多能(iPS)干细胞进行实际冻存测试。

资料来源:瑞典卡罗林斯卡医学院附属医院妇产科临床科学部Outi Hovatta教授

测试冻存液:STEM-CELLBANKER®冻存液 vs 常规细胞冻存液(细胞培养基 + 10% DMSO + 血清代替品)
细胞存活率评估方法:Trypan Blue 和 Live/Dead assay kit试剂盒

結果: 在没有对细胞的染色体组形、增殖能力和分化能力造成影响的情况下,STEM-CELLBANKER®冻存液明显提高了HS293、HS306和ChiPSA细胞的存活率。上图显示STEM-CELLBANKER®冻存细胞的复苏存活率获得明显提高。下图显示各复苏细胞的增殖能。

*鸣谢Outi Hovatta教授和Frida Holm女士提供以上资料

2. 使用STEM-CELLBANKER®对人体间质干细胞(Human Mesenchymal Stem Cells)和血管内皮前体细胞(Endothelial Progenitor Cells)进行实际冻存测试。

筑波大学再生医疗讲座 大根田修教授提供

MSCs EPCs
STEM-CELLBANKER® >95% >90%

细胞株:人体脐带血来源间质干细胞(MSCs)和血管内皮前体细胞(EPCs)
测试冻存液:STEM-CELLBANKER®细胞冻存液
细胞冻存方法:冻存细胞于-80度冰箱, 3日后移至-192度液氮管,冻存72 日后复苏。.
细胞存活率评估方法:Trypan Blue

测试结果:MSCs 和EPCs的存活率分别高达95% 和 90%以上。结果也显示STEM-CELLBANKER®细胞冻存液没有对干细胞的增殖和分化能力造成影响。

欲知详细内容,请参考 MSCs 或 EPCs

*鸣谢 大根田修(Ohneda Osamu)教授和长野真澄(Nagano Masumi)博士提供以上资料

3. 使用STEM-CELLBANKER®对小鼠胚胎干细胞(129SV)进行实际冻存测试。

ZENOAQ研究所 细胞工学组

细胞株:129SV (Mouse ES cell)
测试冻存液:ZENOAQ 产品(CELLBANKER® 1, 1plus, 2 和 STEM-CELLBANKER®

使用手册 (适用于CELLBANKER®系列各产品) :
细胞冷冻保存方法

选择冻存处于对数生长数的细胞有助于提高复苏细胞存活率。

  1. 按照常用方法收集悬浮细胞或贴壁细胞于试管中。
  2. 按照培养细胞密度和所用细胞冻存管的尺寸计算所需冻存细胞数。
    (参考:5×105 至 5×106 cells/ml)。
  3. 取相当于所需细胞数的细胞悬浮液量,置于离心管中,离心收集培养细胞(参考离心条件:1,000~2,000rpm,4°C,3至5分)。移去离心管中的上清液。
  4. 加入适量的CELLBANKER® 细胞冻存液于离心管中,使细胞浓度为 5×105 至 5×106 cells/ml。缓慢地混合均匀,制成细胞混合液。
  5. 将离心管中的细胞混合液分装于已标示完全的冷冻保存管中。
  6. 直接将含细胞混合液的冻存管放入-80°C冰箱,长期冷冻保存。
  7. 若研究者需要液氮保存时,可将完全冻结的冻存管(放入-80°C冰箱后至少一昼夜)移至-196°C液氮罐。
细胞数仅作为参考数据,依据各自目的可有不同

Procedure for Use

冻存细胞复苏方法
  1. 从冰箱里取出细胞冷冻保存管,立即放入37°C 振动水浴槽中快速解冻。
  2. 待冻存管中细胞混合液完全融化后,立即加入1ml细胞培养基于该冷冻管中与细胞混合,再将细胞混合液从冻存管中移入含有9ml该细胞培养基的试管中,混合均匀。
  3. 离心收集培养细胞((参考离心条件:1,000~2,000rpm,4°C,3至5分),移去上清液。
  4. 清洗细胞,充分洗净残留冻存液。
  5. 加入适量的新鲜细胞培养基,使用移液管缓缓地均匀细胞混合液。适量地稀释后,将细胞混合液移至事先准备好的培养瓶中。
  6. 精检后,研究者可根据各自方法和需要来进行细胞培养。
4. 使用STEM-CELLBANKER®对小鼠正常肾脏组织进行冻存测试

资料来源:ZENOAQ中央研究所

STEM-CELLBANKER® → -80℃
HE染色標本 Caspase3免疫染色標本
取材后立刻以福尔马林固定
HE染色標本 Caspase3免疫染色標本

从小鼠取出5mm3大小的肾脏组织,投入1ml的STEM-CELLBANKER®冻存液后直接放置于负80度冰箱进行冻结。之后,对经解冻、清洗、福尔马林固定和石蜡包埋的组织块进行HE染色和Caspase3染色。组织学检查结果发现,与未经冻结的组织状态(对照)相比, STEM-CELLBANKER®冻存组织块没有受到明显的损伤,证明STEM-CELLBANKER®能够应用于冻结组织块。此外,Caspase3染色结果呈阴性反応,表示没有细胞凋亡发生。

5. 利用微阵列芯片(Microarray)对STEM-CELLBANKER®冻存细胞展开基因表达分析

从未经冻存的培养细胞和经STEM-CELLBANKER®冻存的细胞抽出total RNA,以微阵列解析进行遗传基因的平行对比分析。结果发现两组细胞的大多数基因之间的表达变化小于1.6倍。

测试细胞:小鼠肺纤维芽细胞

参考文献

  • Shimazu et al. (2015) Serum- and xeno-free cryopreservation of human umbilical cord tissue as mesenchymal stromal cell source. Cytotherapy, 2015; 17: 593 – 600.
  • Nakagawa M et al. (2014) A novel efficient feeder-free culture system for the derivation of human induced pluripotent stem cells. Scientific Reports 4 Article, number:359.
  • Miyamoto Y et al. (2012) Cryopreservation of Induced Pluripotent Stem Cells. Cell Medicine., Vol. 3, pp. 89-95, 2012.
  • Saliem M et al. (2012) Improved cryopreservation of human hepatocytes using a new xeno free cryoprotectant solution. World J Hepatol. May 27;4(5):176-83.
  • Holm et al. (2010) An effective serum- and xeno-free chemically defined freezing procedure for human embryonic and induced pluripotent stem cells. Hum Reprod. 25(5):1271-9. Epub 2010 Mar 5.
  • Nakamura A et al. (2010) Human primary cultured hepatic stellate cells can be cryopreserved. Med Mol Morphol. 43:107-115.
产品成分说明:
限定化学成分细胞冻存液,含有DMSO、葡萄糖等各种细胞营养成分、pH调节剂等国际药典 [美、欧、日本药方局级]成分。
储存方法
储存于4度以下。质量保障期从产品的生产日期起算,为期3年。3个月以上没有使用CELLBANKER®冻存液的计划时,尽可能冷冻保存。为避免重复冻结-解冻过程可能导致的CELLBANKER®品质下降和性能降低,推荐将 100mL 产品分装小瓶后,再存放于 4°C以下或-20°C冰箱冻存。
质量保障承诺
  1. STEM-CELLBANKER® GMP grade细胞冻存液经过严格内毒素、pH、渗透压和微生物检查,确保产品不含细菌、霉菌以及支原体。
  2. 使用小鼠胚胎干细胞(Mouse ES Cells)、Jurkat 和SK-007细胞验证性能测试冻存细保存活率达80%以上.
注意事项
  1. CELLBANKER®系列产品只供实验室研究使用,是试剂级产品。
  2. 我们推荐用户在使用本产品之前,事先对所使用的细胞进行至少为期 1 周的
    试验性细胞冷冻保存培养。确认性能后再进行正式冻存。
  3. 免责声明: 本公司将不为任何不正常使用此产品时所发生的意外负责。