脱盐/纯化

脱盐即从大分子溶液中去除盐、非水性溶剂和小分子物质的过程。通过换缓冲液，可以最有效地去除溶液中的小分子物质，并逐渐分离纯化出大分子物质。具体方法为：在溶液进行超滤的同时，不断向溶液中补充缓冲液，补充缓冲液的速度与溶液滤过速度相同，使体系始终保持恒定，这种方法又称透析超滤法。

用于超滤的操作方式，选择范围非常广泛。选用何种操作方式主要根据样品处理量、实验室现有设备、滤过速度、用户的实验要求等综合指标来决定。

• 离心

(处理量从100ul到l00ml)

通过离心力，使溶液中的小分子溶质和溶剂透过超滤膜，被收集在滤过液收集管中，而大分子溶质则被超滤膜截留在样品浓缩管中。该方式的特点是操作简便，滤过速度快。

Sartonus提供了10种规格的浓缩离心管，处理量从100ul到l00ml。

• 加压离心

(处理量从5ml到50ml)

加压离心是Sartorius公司特有的操作方式，将浓缩离心管加压后再放入离心机里离心，比单独离心快30-50%，是最快的浓缩方式。

Vivaspin 20和Vivacell 70也可以按照这种方式进行操作。

• 加压

(处理量从5ml到250ml)

用压缩空气或惰性气体作为超滤的动力，超滤的同时通过振荡来避免浓差极化，提高超滤速度。Vivaspin 20、Vivacell 70、Vivacell 100和Vivacell 250适用于这种操作方式，加压后静置即可完成超滤。当需要快速超滤时，可在加压后放在摇床上，边振荡边超滤。

• 切向流

(处理量从100ml到5L以上)

使用蠕动泵送液，溶液沿与超滤膜平行的方向回旋流动，可避免浓差极化，提高超滤速度。

Vivaflow 50和Vivaflow 200是专为这种操作方式设计的。

• 溶剂吸附

(处理量从1ml到20ml)

该方式在超滤膜后加纤维素吸附垫，以吸附力作为超滤的动力，不需要任何附加设备。溶剂和小分子溶质在吸附力的作用下透过超滤膜，而大分子物质则被截留浓缩。Vivapore是专用于这种操作方式的，有5种规格可供选择，样品处理量从Iml到20ml。

选择超滤膜主要根据膜的材质、截留分子量以及综合性能等，但是应注意，膜的最终性能还取决于所需进行超滤的溶液的特性，我们建议用户用不同的膜进行试验，以选出最适合的膜。

• 聚醚砜(Polyethersulfone)

• 三醋酸纤维素(Cellulose Triacetate)

这种膜亲水性强，非特异性吸附极低，溶剂和小分子溶质在滤过时不会因被膜吸附而产生损失，因此在样品清洗、除蛋白以及其它需要回收滤过液的操作中，建议使用三醋酸纤维素膜。

• Hydrosart®

Hydrosart超滤膜的基本特性与再生纤维素类似，Hydrosart在具有极低的蛋白吸附特性的同时，又具有高流速和高通量的特性，是免疫球蛋白浓缩和脱盐的理想用膜

不同膜的性能比较

超滤膜选择指南

Sartorius公司的Vivascience系列超滤产品，采用了先进设计和低吸附材质，同时具有超滤速度快和收率高的优点，当超滤器的大小和膜的截留分子

量选择适当时，回收浓度大于0.1mg/ml的溶质，收率可达90%以上。大部分样品损失是由于滤膜表面和样品容器的非特异性吸附引起的。

• 滤膜吸附

滤膜表面样品的吸附量，与样品的性质以及所选用的滤膜材质有关，一般为2-10 μg/cm2。如果研究的对象是滤过液，由于其滤过时要穿过滤膜的整个内部结构，所以吸附量相对较大，为20-100 μg/cm2。通常截留分子量高的膜吸附较高，而截留分子量低的膜吸附较低。

• 容器吸附

生产超滤器时，通过选用低吸附材质，精细抛光，已最大限度地降低了吸附性，但仍有一些溶质会被容器内壁吸附。与滤膜吸附相比，这种吸附的比例很小，但当容器内壁的表面积相对较大时，也可能成为产品损失的主要原因。

如何提高收率

当需要较高的收率时，尤其当研究的样品对象在微克范围时，Sartorius建议用户考虑以下几点：

• 根据样品处理量，选择最小可用的超滤容器，可以充分利用Vivascience产品滤过速度快的优势。在小容器中反复添加样品，反复超滤。

• 在适用范围内，选截留分子量最低的膜。
• 如果可能，使用水平转头代替角转头离心，这样可减少在离心过程中溶液与离心管接触的表面积。
• 将压力或离心力降低到大约最大推荐数值的一半。
• 避免过度浓缩。最终体积越小，越难得到完全回收。如果可能，在第一次回收后，用一滴或多滴缓冲液润洗容器，然后再次回收。
• 用溶于蒸馏水中的5%SDS、Tween20或TritonX预先浸泡超滤容器过夜，然后在使用前彻底润洗。

为了得到最高的收率，所选滤膜的MWCO，要小于或等于所需截留分子大小的一半。